通用型DNA提取试剂盒

产品货号：

WE0190

中文名称：

通用型DNA提取试剂盒

英文名称：

Universal Genomic DNA Extraction Kit

产品规格：

50T|200T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒适合于从新鲜或冷冻的动物组织、细胞、血液、细菌等多种样品中提取高纯度总DNA。本制品可纯化获得分子量最大为50kb的DNA片段，纯化过程不需使用苯酚或氯仿等有毒溶剂，无需乙醇沉淀。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上，PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可得到高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

组分	50次	200次
Buffer GTL	15mL	60mL
Buffer GL	15mL	50mL
Buffer GW1(浓缩液)	13mL	52mL
Buffer GW2(浓缩液)	15mL	70mL
Buffer GE	15mL	60mL
Proteinase K	25mg	90mg
Proteinase K保存液	1.25mL	5mL
吸附柱DM及收集管	50套	200套

保存：室温

无水乙醇
Enzymatic Lysis Buffer（提取革兰氏阳性菌基因组DNA时须准备）。
Enzymatic Lysis Buffe配方：20mM Tris，pH8.0；2mM Na2-EDTA；1.2% Triton
X-100；终浓度为20mg/mL的Lysozyme（溶菌酶）。

向Proteinase K中加入指定用量(1.25mL或4.5mL)的Proteinase K保存液使其溶解，-20℃保存。配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
如果提取次生代谢产物大量积累或细胞壁厚的细菌培养物的基因组，建议在对数生长期早期收集样品。
第一次使用前应按试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解。
如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入4μL DNase-Free的RNase A（100mg/mL），RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购RNase A溶液(货号：WE0225)。

一、血液及细胞样本基因组提取：

材料处理
- 如果提取材料为哺乳动物抗凝血液（无核红细胞），可直接向50～200μL新鲜或冷冻的抗凝血液样品中加入Buffer GTL补足至200μL；
- 如果提取材料为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，取5～10μL新鲜或冷冻的抗凝血液样品，加入Buffer GTL补足至200μL；
- 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液（最大提取量为5×10⁶个细胞），2000rpm（400×g）离心5分钟，弃尽上清，加200μL GTL，振荡至样品彻底悬浮；
  注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μL浓度为100mg/mL的RNase A溶液(货号：WE0225)，涡旋15秒，室温放置2分钟。
加入20μL Proteinase K。
加入200μL Buffer GL，涡旋震荡充分混匀，56℃水浴10分钟。
短暂离心以去除管盖内壁的水珠。加入200μL无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。短暂离心。
注意：
- 加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
- 加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。一些组织在加入Buffer GL和无水乙醇后可能形成溶胶状产物，此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。
上一个步骤中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm（~13400×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
向吸附柱中加入500μL Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
向吸附柱中加入500μL Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。
12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空加入50～200μL Buffer GE或灭菌水，室温放置2～5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
- 如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0～8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。
- Buffer GE在65～70℃水浴预热，离心之前室温孵育5分钟可以增加产量；用另外的50～200μL Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
- 如果要提高DNA的终浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2～5分钟，12000rpm离心1分钟；若洗脱体积小于200μL，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μL Buffer GE或灭菌水洗脱。
- 因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

二、动物组织基因组提取：

材料处理
如果提取材料为动物组织，取25mg（脾组织用量应少于10mg）；如果材料为鼠尾，取一段长度为0.4-0.6cm的大鼠鼠尾或两段长度为0.4-0.6cm的小鼠鼠尾。
- 样本进行液氮研磨或切成小块后置于1.5mL离心管中，加入180μL Buffer GTL，将不同样品做好标记。
- 若使用匀浆器处理样本，匀浆前向样本中加入不超过80μL Buffer GTL，匀浆后加入100μL Buffer GTL。
  注意：
  ① 确保各组织的量不要超出推荐范围。
  ② 组织样本在加入Buffer GTL之前用液氮研磨或加入Buffer GTL用匀浆器匀浆处理，可以增加裂解效率。
加入20μL Proteinase K，涡旋震荡使样品彻底混匀。56℃水浴，直至组织完全裂解，孵育过程中可每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样品分散。
注意：
- 不同组织消化时间不同，通常1～3小时即可完成，鼠尾需要消化6～8小时，必要时过夜消化，不会影响后续操作。
- 如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质，延长56℃孵育时间或再加入20μL Proteinase K消化。
- 如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μL的浓度为100mg/mL的RNase A溶液(货号：WE0225)，涡旋15秒，室温放置5～10分钟。
加入200μL Buffer GL，涡旋震荡充分混匀，70℃水浴10分钟。短暂离心后加入200μL无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。
注意：
- 加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
- 加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。一些组织（如脾，肺）在加入Buffer GL和无水乙醇后可能形成溶胶状产物，此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。
短暂离心，将步骤3所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm（~13400×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
向吸附柱中加入500μL Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
向吸附柱中加入500μL Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤6。
12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空加入50～200μL Buffer GE或灭菌水，室温放置2～5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
- 如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0～8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。
- Buffer GE在65～70℃水浴预热，离心之前室温孵育5分钟可以增加产量；用另外的50～200μL Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
- 如果要提高DNA的终浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2～5分钟，12000rpm离心1分钟；若洗脱体积小于200μL，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μL Buffer GE或灭菌水洗脱。
- 因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

三、细菌基因组提取：

细菌样本预处理
- 革兰氏阴性菌
  ① 取细菌培养物1～5mL（10⁶～10⁸个细胞，最多不超过2×10⁹个细胞）置于离心管（自备）中，12000rpm（~13400×g）离心1分钟，尽量吸净上清。
  ② 向沉淀中加入180μL Buffer GTL，振荡使菌体重悬。
  ③ 加入20μL Proteinase K，涡旋混匀，56℃孵育，直至菌体完全裂解，孵育过程中每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样本分散。
  注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μL浓度为100mg/mL的RNase A溶液(货号：WE0225)，震荡混匀，室温放置5～10分钟。
  ④ 加入200μL Buffer GL，涡旋震荡混匀。
- 革兰氏阳性菌
  ① 取细菌培养物1～5mL（10⁶～10⁸个细胞，最多不超过2×10⁹个细胞）置于离心管（自备）中，12000rpm离心1分钟，尽量吸净上清。
  ② 加入180μL Enzymatic Lysis Buffer（自备）使菌体重悬。
  ③ 37℃孵育30分钟。
  ④ 加入20μL Proteinase K涡旋震荡，充分混匀。加入200μL Buffer GL，涡旋震荡混匀。56℃孵育30分钟。
  注意：
  ● 如果需要，95℃孵育15分钟可以使病原体失活，但是95℃孵育会造成一些DNA的降解。
  ● 如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μL浓度为100mg/mL的RNase A溶液(货号：WE0225)，震荡混匀，室温放置5～10分钟。
加入200μL无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。
注意：加入无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
将步骤2所得溶液（包括形成的沉淀）全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
向吸附柱中加入500μL Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
向吸附柱中加入500μL Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤5。
12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空加入50～200μL Buffer GE或灭菌水，室温放置2～5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
- 如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0～8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。
- Buffer GE在65～70℃水浴预热，离心之前室温孵育5分钟可以增加产量；用另外的50～200μL Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
- 如果要提高DNA的终浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2～5分钟，12000rpm离心1分钟；若洗脱体积小于200μL，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μL Buffer GE或灭菌水洗脱。
- 因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

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